农药残留快速检测技术目前较多地应用于农贸集市农产品市场、蔬菜生产基地、各大超市以及各地检测站的检测.为提高农产品质量安全,让人们吃上相对安全的蔬菜,避免农药中毒事故发生,尽量减少农药残留对人们的危害。
酶抑制法是根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性,造成神经传导乙酰胆碱的积累,影响正常传导,使昆虫中毒至死这一昆虫毒理学原理,对农药残留进行检测。如蔬菜提取液中不含这类农药残留或残留量较低,酶的活性就不会被抑制,试验中加入的基质就被酶水解或少部分水解,水解产物与显色剂反应产生颜色。反之,酶的活性被抑制,加入的基质不能被酶水解,从而不显色或颜色变化很小,用分光光度计在412nm处测定反应前后吸光度的变化,计算出抑制率,就可以判断蔬菜中含有机磷和氨基甲酸酯类农药的残毒情况。
蔬菜农药残毒快速检测酶抑制技术,简便、灵敏、快速、经济。但在实际检测操作过程中.该技术容易出现样品空白值偏低、样品吸光度值偏高、抑制率为负值以及假阴性和假阳性等问题。现对此检测法进行探讨,从每一个环节上规范操作,使检测数据更精确有效。
1、药品的配制。包括提取液、酶、底物和显色剂的配制。提取液作为其他试剂配制的稀释剂,它的配置是关键的。提取液规定值pH=0.8,在实际配置中应对pH值进行校正。酶液、底物、显色剂按要求配制即可。
2、保存条件。酶、底物、显色剂易变质失效,尤其是夏季。因此,配制过的溶液可采取分装制,即取即用。酶是此检测技术成功与否的关键。酶的种类、活性、纯度、贮存以及酶的浓度都会对测试结果造成很大影响。所以对这些因素的掌握或控制关系到分析的灵敏度、精确度和重现性。
3、样品的选择。叶菜类应去烂叶、枯叶、蕊叶;豆类从表皮至果肉1 -2cm 处,果肉不宜取过多;含叶绿素和其他色素较高的蔬菜取样后不要立即提取,否则易被氧化,提取液颜色变深,产生絮状物。
4、培养条件。培养箱的温度和培养时间要严格控制在37— 41℃ 之间,时长3O分钟。
检测值常出现以下问题:
1、空白值偏小。首先要保证仪器良好的稳定性,其次对从培养箱取出样品到放到检测仪这段时间的长短要严格把握。加入底物后应立即检测,尽量缩短操作时间,否则空白值变小。
2、样品吸光值偏高。这个现象是由于酶本身活性低,样品颜色深以及反应中化学、物理的干扰。使透过光被额外的吸收或被散色,透光率减小,吸光度在数值上表现为增大。
3、检测结果中抑制率为负值。当样品出现较小的负值误差-10%以下,是在允许范围之内的。这是由检测员人为因素导致的。酶分解底物,分解物与显色剂结合的过程很快,检测员稍有耽搁或技术不熟练都会产生人为误差,导致抑制率为负值。
4、假阳性与假阴性。假阳性是由于酶活性降低或失活,底物不与之反应,从而不能被水解,无法与显色剂结合显色。假阴性是因为某些农药对酶抑制作用很小或无作用而产生的,表现出无农药残留的假象。另外,在反应过程中化学、物理干扰都有可能导致假阳性、假阴性的发生。
通过对检测原理的深入了解,检测技术中涉及的各个问题进行分析,提高检测数据的准确性,是每个服务在这项工作中人员的责任与义务。